Moreno Ayala等人首先研究了携带MC38结肠癌、EL4胸腺淋巴瘤或9464D神经母细胞瘤的小鼠中的T细胞表型。尽管Tregs和CD8⁺ T细胞的频率在不同肿瘤中存在差异，但两种细胞群体之间始终存在正相关性。研究人员还注意到，与健康组织和外周淋巴结相比，CXCR3在肿瘤和引流淋巴结中的CD8⁺ T细胞、效应性CD4⁺ T细胞和Tregs上的表达增加。

动力学评估显示，Tregs中CXCR3表达的峰值，与CXCR3⁺CD8⁺ T细胞对肿瘤的浸润有相关性，此时Tregs开始在引流淋巴结中积聚。在肿瘤浸润的高峰期，经历抗原刺激的（CD44⁺）CXCR3⁺ Tregs相对于CD44⁺CXCR3^– Tregs表现出更高的激活标记物和效应功能（CD69、CD103、KLRG1、PD-1和CTLA-4）。综合这些结果表明，CXCR3的表达支持Tregs在肿瘤中的增加积累和激活。

为了专门研究CXCR3对Tregs的影响，Moreno Ayala等人利用雌性小鼠的X染色体失活生成了遗传学小鼠模型。在这些模型中，小鼠含有CXCR3⁺和CXCR3^KO Tregs的异质群体，并可以通过给予白喉毒素来清除其中一种Treg群体（根据模型的不同）。在清除CXCR3⁺ Tregs的小鼠中（只剩下CXCR3^KO Tregs），与保留CXCR3⁺ Tregs完整或清除CXCR3^KO细胞的情况相比，MC38、EL4和9464D肿瘤的生长延迟。当清除一定比例的Tregs而不考虑CXCR3时，这种效应并未观察到，这表明CXCR3⁺ Tregs在特定抑制抗肿瘤效应中发挥着作用。

进一步研究发现，在CXCR3^KO Tregs情况下，包括一群肿瘤抗原特异性CD8⁺ T细胞在内的CD8⁺ T细胞在MC38、EL4和9464D模型的肿瘤中增加。通过体外再刺激后检测IFNγ和TNFɑ的产生量发现，Tregs中的CXCR3缺陷并不影响CD8⁺ T细胞的活性，同样也没有影响PD-1的表达，这表明CXCR3⁺ Tregs限制了CD8⁺ T细胞的积累，但不影响其激活。此外，添加抗PD-1抗体可用于增强抗肿瘤效果。通过观察肿瘤中Treg的积累，研究人员注意到Treg的频率稍微降低并且与CXCR3缺乏呈相关性。在一个基因工程的肉瘤发生小鼠模型（非移植）中也观察到类似的效果，即在肉瘤形成后清除CXCR3⁺ T细胞导致肿瘤内CD8⁺ T细胞增加和Tregs减少。

观察CXCR3^KO Tregs的特性，研究人员注意到在MC38肿瘤进展过程中，PD-1和CTLA-4的表达降低，表明其活化表型较弱。在同时存在CXCR3⁺和CXCR3^KO Tregs的小鼠中进行直接竞争性测试时，与CXCR3⁺细胞相比，CXCR3^KO Tregs在肿瘤和引流淋巴结中所占的Tregs比例较小，并且表达的PD-1和CTLA-4较少，再次表明CXCR3有助于肿瘤组织中Treg的优先积累和激活。更进一步，研究人员通过过继性地转移体外激活和分化的表达或不表达CXCR3的Th1样Tbet⁺ Treg，随后检测了CXCR3⁺ Treg的积累。在转移到MC38肿瘤小鼠后，与WT Tregs相比，CXCR3^KO Tregs在引流淋巴结中富集，但在肿瘤中减少，这表明CXCR3表达本身对于Treg在肿瘤中的累积至关重要。

接下来，研究人员假设Tregs中的CXCR3可能通过促进Treg与DC的共定位和调节来发挥作用，已知在C57BL/6小鼠中，DC产生CXCR3配体CXCL9和CXCL10。为了研究这一点，研究人员开发了一种带有荧光标记的小鼠模型，使他们能够可视化和量化Tregs与CD11c⁺ DC以及CD8⁺ T细胞与DC之间的相互作用。结果显示，CXCR3缺陷的Treg与DC相互作用的可能性低于CXCR3正常的Treg，而当Treg缺乏CXCR3时，CD8⁺ T细胞增加并更可能与DC相互作用。在同时存在CXCR3⁺和CXCR3^KO细胞的竞争性环境中，Treg与DC之间的相互作用的结果类似，但对CD8与DC之间的相互作用的影响被逆转了。

研究人员观察了CXCL9和CXCL10的产生情况，发现CXCL9几乎完全由DC产生，而CXCL9⁺CD11c⁺细胞的数量与野生型Tregs的数量呈正相关。当Tregs中敲除CXCR3时，这种正相关性较弱，并且在CXCL10中没有观察到这种现象，因为CXCL10的产生不仅限于DC。在缺乏CD8⁺ T细胞或IFNγ的情况下，CXCL9减少，这支持了一种假设，即CD8⁺ T细胞产生的IFNγ可能有助于DC上调CXCL9的表达，从而吸引CXCR3⁺ Tregs。通过过继转移实验进一步支持了这一假设，结果显示在缺乏DC1的小鼠中，CXCR3⁺ Tregs在肿瘤中累积增多的现象消失了。

最后，研究人员假设CXCR3⁺ Treg细胞可能调节DC1激活抗肿瘤CD8⁺ T细胞反应的能力，使用表达OVA的MHC-I缺陷的MC38肿瘤来测试他们的假设，这使得研究人员能够测量CD8⁺ T细胞对DC交叉呈递的反应。结果显示，在CXCR3^KO Tregs的背景下，肿瘤和引流淋巴结中的OVA特异性CD8⁺ T细胞显著增加，而在CXCR3⁺ Tregs的背景下则没有。这种效应依赖于DC1的存在。使用结合SIINFEKL/H-2Kb复合物的抗体进一步确认了DC1对肿瘤抗原的交叉呈递增强。

总的来说，这些结果描述了一种机制，即CD8⁺ T细胞产生的IFNγ增强了DC1中CXCL9的表达，从而招募CXCR3⁺ Tregs。这些CXCR3⁺ Tregs反过来增加了CXCL9⁺ DC1的数量，但限制了DC1对肿瘤抗原的交叉呈递，阻碍了抗肿瘤CD8⁺ T细胞的激活过程，并限制了它们对癌症进展的控制能力。Tregs中的CXCR3敲除增强了DC1的交叉呈递、CD8⁺ T细胞的激活和抗肿瘤效果，这表明CXCR3可能成为癌症免疫治疗的潜在靶点。