仪器介绍

    该流式细胞仪为广州中医药大学基础医学院中西医结合基础研究中心仪器，本文对仪器基本参数、使用规范及操作流程进行简要介绍。BD Accuri C5流式细胞仪只有一个激光器，配有三个荧光通道，FL1、FL2、FL3，可以进行Annexin V/PI凋亡检测、ROS检测等基本实验，具有方便快捷的特点。若需要进行更加复杂的检测可使用中心另一台BD LSRFortessa流式细胞仪。

开机前的准备

• 开机前请检查仪器左侧黄绿蓝三个瓶子是否液体充足，如果缺少请按照说明进行配制。红色瓶子为废液，快满的时候请倒掉。如有问题请联系助管，配制所需试剂放置于仪器下方抽屉中。

• 配制方案为说明书推荐方案，个人觉得可以通过增大稀释倍数来节约试剂的用量，比如可以减半。

黄色瓶子

Decontamination Conentrate Solution（净化浓缩液） Cat No. 653154 Instructions: Add contents of bottle to 180 ml of filtered deionized water.
把对应的瓶子清洗干净，如果有脏东西就用刷子刷干净后再纯水润洗，清洗干净后倒一瓶净化浓缩液进去，然后用纯水加满瓶子混匀即可。

绿色瓶子

Cleaning Concentrate Solution（清洁浓缩液） Cat No. 653157 Instructions: Add 3 ml to 197 ml of filtered deionized water. Diluted solution should be used within 2 weeks.
加3ml清洁浓缩液至对应的瓶子中，然后补满纯水即可，稀释后的溶液应在2周内用完。

蓝色瓶子

Bacteriostatic Concentrate Solution（抑菌浓缩液） Cat. No. 653156 Instructions：Add contents of bottle to 1.0L of filtered deionized water.
加一瓶抑菌浓缩液至1L纯水中，稀释后的溶液当做鞘液来用，装鞘液的瓶子大概是2L体积，倒两瓶抑菌浓缩液进去再补满纯水即可。

仪器开机

开启仪器电脑

• 微信扫描电脑旁边的佰能二维码开启电源；

• 在上样针处放上一管ddH2O,点击仪器前方的电源键（点击一下即可，不必长按）开启仪器，启动过程持续约5分钟；

启动软件

• 仪器启动过程中点击启动桌面上的BD Accuri C6 Software，本仪器上机操作及数据导出均使用该软件，仪器产生的数据为特殊格式，只能由该软件打开，若要用FlowJo处理请使用该软件导出FCS格式通用文件，导出方法后续介绍，若要下载该软件BlogWK公众号对话框回复2007131获取下载链接；
  

• 当软件96孔区域下方出现如下图提示仪器即启动完成；
  

• 仪器启动完毕后，推荐上ddH2O运行至少5分钟，然后点击Unclog排除气泡，然后再进行样本检测。

样本检测

上样前，确认样本细胞是否已过滤（70um孔径滤网过滤），去除样本中的细胞团块，以防止管路堵塞；上样时需要混匀样本。每个样品上机前可先点击1次Backflush清洗后再跑下一个样品以排除上一个样品的残留。

设置上样条件

    放置样品于上样处，如下图，可以设置无限制地跑，也可以设置颗粒（events）数目、时间或体积的限制；上样速度有三种，低中高，可在Fluidics处设置；

画图

• 提供三种形式的图形，分别是峰图，散点图，密度图，根据需要选择；
  

• 点击坐标轴红框处可以选择通道；
  

• 点击“Plot Spec”，选择“linear”或“log，设置坐标轴显示范围；
  

• 如果细胞超出边界可以用下图红框右边的工具将其缩小，如果细胞太靠近在坐标轴原点处，则可以使用放大工具将其放大；
  

设门

• 点击任一设门工具（多边形工具或矩形工具，图片左下方），圈定特定的区域，设置为门，如下图我设置了一个名为P3的门；
  

• 设好一个门之后我们在新建另一张图的时候就可以设置显示的细胞是P3门里的，点击图片上方的Gate，然后如下图设置；
  

• 设置好门后可以在Run的时候设置门里的细胞收够某个数量的时候停止；
  

数据导出

    如下图所示，点击File-Export All Samples as FCS即可将数据导出为通用的FCS流式数据文件，方便后续通过FlowJo进行数据分析及作图；
也可以在自己电脑上安装BD Accuri C6 Software软件后在自己电脑上进行导出处理。

实验后的清洗及关机

• 放置一管 ddH2O，运行 2 分钟；

• 使用完毕后用次氯酸钠Clean液（Clean液可以与大流式共用，50ml管子分装一些到小流式处，用完后助管补充）快速模式上样清洗2分钟；

• 再用ddH2O上样清洗2分钟，退出软件，关闭电脑；

• 按电源键关闭仪器，注意关闭机器时不要过长时间按电源键，按1-2秒灯开始闪烁即可，长按电源键会强制关机，会对仪器造成较大损害并且会造成下次启动时间非常长（约13分钟），若后面的使用者发现仪器异常关机可向助管投诉！

仪器收费标准

仪器按使用时长进行计费

• 院内用户 30元/小时

• 院外用户 50元/小时

• 校外用户 80元/小时

助管值班表及联系方式

• 本微信公众号对话框发送200713获取流式助管值班表及联系方式。

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本篇文章来源于微信公众号: OncoLab